A pintura, comissada pelo imperador Carlos V, foi executada em Augsburg em 1548. Isabella de Portugal (1503-1539) casou-se com o imperador Carlos V em 1526. Ela morreu muito jovem, quando ela tinha apenas 36 anos, e muito antes de Charles V ter encomendado Titian para pintar seu retrato. Seu rosto pálido enfatiza sua maciez, que também é visível nos dedos esbeltos de suas mãos. Todo o retrato está centrado em torno de uma excelente harmonia de cor do vermelho, branco e ouro. Um contraste de cor encantador é fornecido pelas marés azuis e verdes da paisagem, e os olhos da imperatriz.